本发明属于荧光探针技术领域，公开了一种检测DNA损伤的荧光探针及其制备方法和应用。本发明将对苯二甲醛与化合物R2‑H在催化剂存在下于有机溶剂中进行反应，得到中间产物；将中间产物与化合物R1‑H在催化剂存在下于有机溶剂中进行反应，得到荧光探针。该荧光探针可实现“先猝灭”识别正常DNA分子；基于DNA损伤作用不同，荧光强度变化趋势不同，致使荧光变化，实现“后荧光”识别DNA分子损伤情况。此外，本发明所述的荧光探针具有良好的生物相容性以及优秀的细胞膜通透性，同时还具有较低的生物毒性、光毒性、光漂白性，其光谱范围与生物样品的光谱范围有足够大的差异，可以避免生物自发荧光的产生。

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