本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种重组EBV gHgL免疫原的制备方法及其应用。本发明利用聚合酶链式反应PCR技术，获得gH和gL的基因片段，将这两个目的片段分别克隆入昆虫表达载体pMT，经质粒大提去除内毒素后，与抗性筛选质粒pCoBlast一起共转染黑腹果蝇Schneider2细胞，用杀稻瘟菌素进行阳性克隆筛选，筛选出高效分泌表达gHgL的S2稳定细胞系。扩大培养后，经镍柱亲和层析和凝胶过滤层析两步纯化，即可获得高均一、高产量、高天然保真性的gHgL。通过微量热涌动技术验证了gHgL与受体EphA2的相互作用，适合作为免疫原用于EBV亚单位疫苗以及与gB和gp350联合疫苗的研发。

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