本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及人源Tsg101‑Vps28‑Vps37‑Mvb12A四元复合物的制备方法及应用。通过分别针对人源Tsg101、Vps28、Vps37和Mvb12A设计截短体；获取组成人源ESCRT‑I复合物的四种亚基的截短体编码序列片段；分别克隆至昆虫表达载体并转化DH10Bac感受态细胞获得重组Bacmid杆粒；将四种重组杆粒分别转染sf9昆虫细胞产生重组杆状病毒并扩增至P2代病毒储液，将四种P2代病毒等比例感染sf9细胞进行目的蛋白表达；经层析纯化获得人源ESCRT‑I四元复合物。该复合物为解析ESCRT‑I复合物结构及阐释ESCRT‑I复合物介导膜出芽机制奠定基础。

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